核心结论：PBS 全称 Phosphate Buffered Saline，磷酸盐缓冲生理盐水，常规是0.01 mol/L 磷酸盐，0.137 mol/L NaCl，2.7 mmol/L KCl，缓冲体系依靠 Na₂HPO₄ / NaH₂PO₄配比调节 pH，常用范围 pH 7.0、7.2、7.4、7.6，细胞实验最主流是 pH7.4。配制完成后必须用 pH 计实测校准，因为温度、试剂纯度会影响最终 pH。
一、经典 1×PBS（1 L）基础组分
| 试剂 | 质量 |
|---|---|
| NaCl | 8.00 g |
| KCl | 0.20 g |
| Na₂HPO₄（无水） | 1.44 g |
| KH₂PO₄ | 0.24 g |
✅ 这套标准配方成品 pH≈7.4
⚠️ 如果使用带结晶水 Na₂HPO₄・12H₂O，称量改为 3.62 g
二、不同 pH 1×PBS 1L 配方（磷酸盐体系，维持离子强度相近）
原理：提高 Na₂HPO₄比例 → pH 升高；提高 KH₂PO₄比例 → pH 降低
| 目标 pH|Na₂HPO₄（无水）|KH₂PO₄|NaCl|KCl|
|pH 7.0|0.96 g|0.48 g|8.00 g|0.20 g|
|pH 7.2|1.16 g|0.36 g|8.00 g|0.20 g|
|pH 7.4|1.44 g|0.24 g|8.00 g|0.20 g|
|pH 7.6|1.74 g|0.16 g|8.00 g|0.20 g|
配制方法：全部试剂溶于约 800 mL 超纯水，搅拌溶解，定容至 1 L，用浓 NaOH 或者稀 HCl 微调 pH 至目标值，pH 计读数稳定后记录，高压灭菌或者过滤除菌备用。
三、10×PBS 储存液（母液）
10× 母液就是上面组分放大 10 倍，使用前用超纯水稀释成 1×，稀释之后再复测 pH，稀释会轻微改变 pH。
例：10× PBS pH7.4（1L）
NaCl 80 g；KCl 2 g；无水 Na₂HPO₄ 14.4 g；KH₂PO₄ 2.4 g
四、两种常用配制思路对比
- 配比预调法（上表方案）：提前调整两种磷酸盐比例，适合批量配液，适合常规 WB、免疫组化、细胞洗涤
- 终调法（推荐）：先全部溶解，再用 NaOH/HCl 滴定到目标 pH，精度更高，是实验室首选
五、重要注意事项
- PBS 缓冲能力有限，pH 适用区间大约 6.8~8.0，如果需要 pH＜6.8 或者＞8.0，不建议继续使用 PBS，应更换其他缓冲体系（如 HEPES、碳酸盐缓冲液）
- 细胞培养用 PBS 一般不含钙镁（-/- PBS），如果需要含钙镁（+/+ PBS），额外添加 CaCl₂、MgCl₂，注意要单独溶解防止磷酸盐沉淀
- 温度会改变磷酸盐 pKa，25℃标定 pH，37℃使用时 pH 会小幅偏移
- 结晶水试剂一定要换算分子量，否则浓度、pH 都会偏差
FAQ
问题 1 PBS 为什么最常用 pH7.4
回答 1 pH7.4 接近人体生理血液 pH，细胞、抗体活性最优，WB、免疫荧光、细胞洗涤实验绝大多数都选用 pH7.4 的 PBS 配方。
问题 2 配好 PBS pH 偏高怎么办
回答 1 可以滴加稀 HCl 缓慢下调 pH；pH 偏低则滴加稀 NaOH 上调，滴定的时候边搅拌边用 pH 计监测，避免调过。
问题 3 PBS 可以配 pH6.0 吗
回答 1 磷酸盐体系在 pH6.0 缓冲能力很弱，不推荐，该 pH 建议改用 MES 缓冲体系。
问题 4 含钙镁 PBS 和普通 PBS 配方差别
回答 1 普通 PBS 没有 Ca²⁺、Mg²⁺，含钙镁 PBS 需要额外加入氯化钙和氯化镁，配制时要防止生成磷酸钙沉淀。
免责申明：本配方为实验室通用参考配方，不同实验（细胞培养、蛋白纯化、电镜）对渗透压、离子强度要求存在差异，正式实验请结合文献和 SOP，最终 pH 必须以 pH 计实测为准。
